原代培養及操作步驟

　　原始分離細胞培養是指將組織從供體中取出，經機械和消化分離為單個細胞或單一細胞型細胞群，使之能在體外模擬人體的生理環境，在無菌、適宜的溫度和一定的營養條件下存活，成長與繁殖原代培養細胞常具有不同的細胞成分，生長緩慢，但更能代表所產生的組織細胞類型和表達組織特異性。用原代細胞培養法進行各種實驗，如藥檢、細胞分化、病毒學檢測等。濟南格艾特組培設備公司介紹具體的實施步驟如下。

　　1.剪切組織首先用D-Hanks或 Hanks液體清洗得到的組織，除去表面的血污，并用外科手術鉗除去那些不需要培養的組織，例如粘著的結締組織。

　　再洗一次后，用手術刀將這些組織切成許多小塊，放入青霉素瓶或小燒杯中，加入適量的緩沖液，用彎刀剪，反復剪切這些組織，直到形成糊狀，約1mm3大小。靜置一段時間后，用吸管吸掉上面的液體，加入合適的緩沖液，再進行清洗。

　　2.消化分離分離的目的是將組織塊細小的組織塊分離為細胞團或單個細胞，以便于進一步培養，目前常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

　　3.利用細胞懸液的計數板進行細胞計數。通過調節細胞數量到(2~5)×105 cells/ml，或實驗所需的密度，在培養瓶中分裝細胞懸液量，使細胞懸液量稍高于培養瓶底為宜。放入CO2培養盒，5%CO2,37℃靜置培養。通常在3~5天內，原代培養細胞就能粘附于瓶壁，并展開生長，補加原培養液量1/2的新培養液，繼續培養2~3 d后再換液，一般7~14天就能長滿瓶壁。

　　4.濟南格艾特組培設備公司講解注意事項

　　(1)無菌操作：細菌或霉菌污染是培養失敗的常見原因，每個環節都要加強無菌操作觀念，預防為主，一旦污染，一般很難消除。

　　(2)培養液：所用的培養液必須滿足細胞生存和生長的要求。不同來源的動物、組織類型對培養液的要求也有所不同，必要時可采用預實驗的方法來選擇合適的培養液。

　　(3)小牛血清：小牛血清在維持培養細胞存活和促進細胞增殖方面發揮著重要作用。可以選擇不同批號的小牛血清用于小樣本分析。在確定了某一生產廠家的特定批次小牛血清后，保持應用直到試驗結束。

　　(4)膠原酶溶液：需新鮮配制，儲存時間太長(甚至-20℃低溫保存)，也會影響消化的效果，導致消化時間延長，細胞損傷程度增加。

　　濟南格艾特組培設備公司講解的原代培養及操作步驟，大家如果對細胞培養操作步驟感興趣可以持續關注我們!