植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的技術(shù)性強,要求無菌操作,通過本實驗可初步掌握常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù),加深對無菌操作的了解.

　　植物的全能性：植物體的任何一個細(xì)胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力,稱為植物的全能性.

　　植物組織培養(yǎng)就是利用植物的全能性進(jìn)行離體無菌植物培養(yǎng)的一門技術(shù).植物組織培養(yǎng)按其原始意義,就是指愈傷組織培養(yǎng).但發(fā)展至今,其范圍日益擴大,已包括植物和它的離體器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體的離體無菌培養(yǎng).因此,擁有幾種不同水平的培養(yǎng)技術(shù),即整體的、器官的、組織的、細(xì)胞的和原生質(zhì)的培養(yǎng)技術(shù).它們的涵義是：

　　1.植株培養(yǎng).指以具備完整植株形態(tài)的材料(如幼苗和較大的植株)外植體的無菌培養(yǎng).

　　2. 胚胎培養(yǎng).指以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養(yǎng).

　　3. 器官培養(yǎng).指以植物的根,莖,葉,花,果等器官為外植體的離體無菌培養(yǎng),如根的根尖和切段,莖的莖尖,莖節(jié)和切段,葉的葉原基,葉片,葉柄,葉鞘和子葉,花器的花瓣,雄蕊(花藥,花絲),胚珠,子房,果實等的離體無菌培養(yǎng).

　　4. 組織培養(yǎng).指以分離出植物各部位的組織(如分生組織,形成層,木質(zhì)部,韌皮部,表皮,皮層,胚乳組織,薄壁組織,髓部等),或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無菌培養(yǎng).這是狹義的組織培養(yǎng).

　　5. 細(xì)胞培養(yǎng).指以單個的游離細(xì)胞(如用果酸酶從組織中分離的體細(xì)胞,或花粉細(xì)胞,卵細(xì)胞)為接種體的離體無菌培養(yǎng).

　　6. 原生質(zhì)體培養(yǎng).指以除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無菌培養(yǎng).

　　儀器設(shè)備：

　　1.酒精燈、100ml三角燒瓶,9厘米培養(yǎng)皿;

　　2.鑷子、剪刀、解剖針;

　　3.雙筒解剖顯微鏡;

　　4.光照培養(yǎng)箱或溫室;

　　材料和試劑：

　　1.材料 煙草無菌苗、豌豆幼苗.

　　2.試劑

　　(1)MS培養(yǎng)基,植物激素：NAA、6-BA等;

　　(2)飽和漂白粉液(次氯酸鈉);

　　(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;

　　(4)無菌水

　　實驗步驟：

　　1.煙草無菌苗的快速切繁—繼代培養(yǎng)：(要求完全無菌操作)

　　每組一瓶煙草無菌苗,請細(xì)心操作,以免污染.

　　(1) 在實驗臺上,點著酒精燈,將雙手用酒精棉球擦拭消毒,打開生長好無菌煙草苗的三角瓶,三角瓶的瓶口使用前后需在酒精燈外焰上燒過滅菌.

　　(2) 用滅菌的鑷子輕輕捏出1株幼苗,用滅菌的剪刀將無菌苗剪成0.5-1厘米的小段,要求每段至少包含一個生長點,直接剪入盛有MS培養(yǎng)基的三角瓶中,每一個切段必須直接接觸培養(yǎng)基,三角瓶口重新燒過滅菌,并重新封好口.

　　(3) 在光照培養(yǎng)箱中15~25℃,16小時光照條件下培養(yǎng)4周,可長成完整植株,能用于田間移栽.

　　2.豌豆苗的莖尖培養(yǎng)

　　⑴ 取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株,簡取1厘米左右的莖尖,浸入70%的酒精中1分鐘,再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘,(此步以后要求無菌)用無菌水中沖洗5次,在滅菌的濾紙上吸干水分,放入滅菌的培養(yǎng)皿中.

　　⑵ 在雙目解剖鏡下,用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長錐,用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐.

　　⑶ 將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織形成,用封口膜將培養(yǎng)皿封好.在恒溫培養(yǎng)箱中,26℃下,培養(yǎng)六周,形成愈傷組織,經(jīng)繼代后,可用于生根培養(yǎng).